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細胞因子ELISA試劑盒液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
血漿: 應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
尿液: 用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
細胞培養(yǎng)上清: 檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。
ELISA試劑盒的實驗條件如下:
1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維 素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。
2、包被抗體或抗原的選擇:將抗體或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一 般要求PH在9.0~9.6之間。
3、 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其 它條件或采取“方陣法",在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
4、酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,細胞因子ELISA試劑盒應(yīng)注意防護。